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PCR實驗室

作者:佚名    發(fā)布于:2017年10月30日    來源:本站原創(chuàng)    點擊:



第二節(jié) PCR實驗室
 
基因擴增實驗室又稱PCR實驗室,室驗室原則上分為4個單獨的工作區(qū)域,前兩區(qū)為擴增前區(qū),后兩區(qū)為擴增后區(qū)。擴增前區(qū)與擴增后區(qū)應嚴格分開。實驗材料、試劑、記錄紙、筆、清潔材料等,只能從擴增前區(qū)流向擴增后區(qū),即從試劑準備區(qū)→樣品制備區(qū)→擴增區(qū)→擴增產物產物分析區(qū),不得逆向流動。實驗室的氣體也應從擴增前區(qū)流向擴增后區(qū),不得逆向流動。各工作區(qū)域應設置緩沖是,工作間與緩沖之間宜安裝連鎖裝置。不同功能的核酸檢驗工作區(qū)應是分隔獨立的工作室,并有明顯的標示,各區(qū)間不能直通。各區(qū)之間如果是緊密相連,需安裝物品傳遞窗。每個工作區(qū)域的頂部應安裝紫外燈。紫外燈的波長為 254nm,安裝數(shù)量為每20㎡安裝一支40W的紫外燈。PCR實驗室
 實驗室較為理想的布局模式為有一個專用走廊,試劑準備區(qū)、樣品制備區(qū)、擴增區(qū)和產物分析區(qū)很規(guī)范地排列在一起,前三個區(qū)各有一個緩沖間,可供換工作服和工作鞋使用,頂上可裝一紫外燈。內實驗區(qū)域設為正壓或常壓狀態(tài),緩沖區(qū)內設為負壓狀態(tài)(可上設一抽風裝置),使這三個區(qū)的空氣流向為由實驗區(qū)域內向外,緩沖間內通向內實驗室和走廊和門可安裝一種連鎖裝置,當一個門打開時,另一門必須處于關閉狀態(tài),防止出現(xiàn)兩個門同時打開的情況。產物分析區(qū)可不設緩沖間,但應設為負壓狀態(tài)(裝一個排風扇即可),使空氣流向由外向內,以防止擴增產物的隨空氣流出。每一區(qū)域都必須有明確的標記,工作按試劑準備區(qū)、樣品制備區(qū)、擴增區(qū)至產物分析區(qū)單一流向進行,各區(qū)的儀器設備包括工作服、鞋、實驗記錄本和筆等都必須專用。如果無法做到以上模式。以下基本要求必須做到:PCR實驗室
(1)四個區(qū)域必須是相互獨立的。
(2)各區(qū)的儀器設備及各種物品必須是專用的。
(3)各區(qū)完全獨立,緩沖間可有可無。如為一個區(qū)套一個區(qū)的模式,區(qū)間不能直通,應有緩沖間,供換工作服及鞋子用,并保證兩個區(qū)域間始終處于完全的分隔狀態(tài)。
(4)產物分析區(qū)應安裝排風扇或其他抽風裝置,維持負壓。PCR實驗室
二、各區(qū)功能及主要設
(1)試劑準備區(qū):擴增試劑的配制、分裝和保存。未設緩沖間的試劑儲存和準備區(qū),工作區(qū)域為正壓。用于擴增的試劑應冰凍儲存。主要設備―天平、冰箱、離心機、加樣器、振蕩器、紫外燈。
(2)樣品制備區(qū):實驗室樣品的混樣和測試樣品的制備。未設緩沖間時工作區(qū)域為負壓或減壓,可安裝排風系統(tǒng)。所用的器具在使用前應經過徹底清洗并消毒,防止交叉污染。主要設備有冰箱、生物安全柜(或潔凈工作臺、排風柜)、離心機、加樣器、振蕩器、恒溫水浴、上下水設備、廢棄物容器、紫外燈。根據(jù)制備樣品的性質和要求決定操作臺是選用生物安全柜、潔凈工作臺還是排毒柜,如疾控中心、臨床醫(yī)學實驗室—般選用生物安全柜,植物轉基因、檢疫等可選用排毒柜,樣品制備需要較高潔凈條件的選用潔凈工作臺
(3)擴增區(qū):PCR擴增反應體系的配制和模板的加入,核酸擴增。未設緩沖間的擴增區(qū),工作區(qū)域為負壓或減壓,可安裝排風系統(tǒng)。加樣應在超凈工作臺(生物安全柜)內進行,超凈工作臺的的氣流方向宜選擇垂流式。核酸擴增設備、冰箱、潔凈工作臺(生物安全柜)、離心機、加樣器、廢棄物容器、紫外燈。
(4)擴增產物分析區(qū):擴增產物的測定。未設緩沖間的擴增產物區(qū),工作區(qū)域為負壓或減壓,應安裝排風系統(tǒng)。若實驗僅采用全自動擴增檢測儀(如實時熒光定量PCR儀)可將擴增區(qū)與擴增產物分析區(qū)合并為一個區(qū)。本區(qū)所使用的儀器設備有酶標儀、洗板機、加樣器和水浴箱等。
三、實驗室空調通風系統(tǒng)設計及壓力控制
各個區(qū)域之間應具備單向的實驗工藝流、物流、人流與與流,形成單向流程的保護屏障,避免實驗之間的相互干擾,防止核配氣溶膠對實驗過程造成污染產生假性結果。
PCR實驗室并沒有嚴格的凈化要求,但是為避免各個實驗區(qū)域交叉污染的可能性,宜采用全送全排的氣流組織形式。同時,嚴格控制送、排風的比例以保證各實驗區(qū)的壓力要求。
四、實驗室裝修
實驗室的墻體,包括頂棚,應結構牢固、氣密性好;所有陰角宜采用圓弧形線條過渡;墻體內壁光潔、不吸附、耐腐蝕、易清洗消毒;地面材料應滿足無縫隙、無滲漏、光潔、耐腐蝕的要求。地面建議使用PVC卷材地面或自流坪地面,整體性好,便于進行清掃,耐腐蝕。沒有條件的也可采用水磨石地面,或大塊的瓷磚(≥800mm)接縫需要小于2mm。燈具要選用凈化燈具,能達到便于清洗、不積塵的特點。
在三個實驗區(qū)和三個緩沖區(qū)頂部以及傳送窗內部安裝有紫外燈,供消毒用。在試劑準備區(qū)和樣品制備區(qū)還設置移動紫外線燈,對實驗桌進行局部消。
試劑和標本通過機械連鎖不銹鋼傳遞窗傳遞,保證試劑和標本在傳遞過程中不受污染。
試劑和樣品通過機械連鎖不銹鋼(不建議使用電子連鎖)傳遞窗傳遞,保證試劑和樣品在傳遞過程中不受污染(人物分流)
五、注意問題
(1)幾個區(qū)域的大小設置情況,應該是試劑準備區(qū)、產物擴增區(qū)、擴增分析區(qū),要小—些。樣品制備區(qū)應大—些,因為樣品制備室要放置—個生物安全柜和一個低溫冰箱。
(2)試劑準備區(qū)、樣品制備區(qū)設立緊急洗眼器,以備不時之需
(3)PCR實驗室的潔凈度可以根據(jù)用戶的實際使用情況和資金的投入設計。
 


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